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            抗體原料

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            乙型肝炎表面抗原單克隆抗體

            發布日期:2019-01-09 08:53瀏覽次數:

            乙肝表面抗原(HBsAg),是乙肝病毒的外殼蛋白,在乙肝病毒感染早期出現于病人血循環中,可持續數月,數年乃至終身,是乙肝病毒感染的標志。因此,HBsAg檢測常用于臨床乙肝病毒感染診斷和治療評價,以及無償獻血血源篩查中。
            人乙型肝炎病毒(HBV)的外膜由3種表面抗原蛋白構成,其C端序列相同,其中主蛋白(S)(也稱小分子蛋白)是一個由226個氨基酸組成的多肽,中蛋白(M)是在S蛋白的N-端加了55個氨基酸(也稱前S2區),大蛋白(L) 是依據病毒亞型在M蛋白的N-端再加了108或119個氨基酸(也稱前S1區)。主蛋白S是人乙型肝炎病毒的主要組成成分,結構和功能研究結果表明,S蛋白疏水區域(殘基99-169)參與抗HBsAg抗體的結合。
            對HBsAg檢測的關鍵核心技術在于獲得一對活性效價高,親和力強,抗原結合位點不存在空間結構干擾的單克隆抗體。由于HBsAg是一個表面結構復雜的多肽,制備滿足上述條件的抗HBsAg 單克隆抗體技術難度較大。本公司研發團隊從 HBsAg 優勢抗原結構優化修飾著手,采用酵母表達了HBsAg 抗原蛋白,并以此抗原免疫小鼠,經過多年的不斷融合、篩選,從幾百個單克隆雜交瘤細胞株中成功篩選出2株配對良好的 HBsAg 單克隆抗體雜交瘤細胞株。用其制備的金標檢測試劑產品對兩百多份臨床乙肝患者血清樣本進行性能評價,同時用進口羅氏HBsAg 化學發光定量檢測試劑盒進行平行對比實驗。

            • 稀釋線性

            用自制的鼠源抗血紅蛋白單抗(7A8)進行膠體金標記,用自制的的另一株鼠源血紅蛋白單抗(6B9)包被硝酸纖維素膜,按“雙抗體夾心”金標免疫層析檢測試劑產品的制備工藝并進行陰陽符合率、穩定性及CV值檢測。結果顯示:自制HBsAg金標檢測試紙條的檢測靈敏度均可達到2.5 ng/mL,而且在25 μg/mL-2.5 ng/mL濃度范圍內有較好的線性關系(R2 = 0.999),可定量檢測。

            • 臨床比對

            自制HBsAg金標檢測試紙條對264份乙肝患者陽性血清檢測陽性率為87.5%,與HBsAg化學發光法定量檢測盒檢測陽性率一致(87.5%),高于同類試劑A(86.7%)和B(86.7%)0.8個百分點,結果見表1和圖1。

            表1:乙型肝炎患者陽性血清檢測結果 自制試劑及對比試劑對乙肝患者陽性血清檢測陽性率
            項目 自制試劑 化學發光 金標試劑A 金標試劑B 1560473279(1)
            -264 -264 -264 -264
            陽性數 231 231 229 229
            陰性數 33 33 35 35
            陽性率 87.50% 87.50% 86.70% 86.70%
             


            參考文獻:
            [1] 乙型肝炎病毒的傳播

             

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