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            抗體原料

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            人血紅蛋白單克隆抗體

            發布日期:2019-01-09 08:53瀏覽次數:

            大便隱血(FOB)(亦稱大便潛血)是指消化道少量出血,紅細胞被消化破壞,糞便外觀無異常改變,肉眼和顯微鏡下均不能證實的出血。在臨床消化道惡性腫瘤早期20%的患者可出現隱血試驗陽性,晚期病人的隱血陽性率可達到90%以上,并且可呈持續性陽性;消化道出血,消化道潰瘍病人糞便隱血試驗多呈間斷性陽性;痢疾、直腸息肉、痔瘡出血等也可使糞便中出現較多紅細胞導致隱血試驗陽性。因此,大便隱血檢查可作為檢測各種原因所致的消化道出血的重要檢測試驗,是較為有效的方法。
            FOB檢測靶物質是大糞中的人血紅蛋白(Hb)。Hb的結構較為復雜,每個Hb分子由1個珠蛋白和4個血紅素(又稱亞鐵原卟啉)組成。Hb分子是由4個單體構成的四聚體。不同Hb分子的珠蛋白的多肽鏈的組成不同。成年人Hb(HbA)的多肽鏈由2條α鏈和2條β鏈構成,為α2β2結構。胎兒Hb(HbF)由2條α鏈和2條γ鏈構成,為α2γ2結構。出生后不久HbF即被HbFA所取代。每條α鏈含141個氨基酸殘基,每條β鏈含146個氨基酸殘基。
            為了克服Hb單抗制備中的技術難題,本公司研發團隊,從人紅細胞制備純化人Hb蛋白,并以此抗原免疫小鼠,經過多年不斷融合,篩選,從幾百個單克隆雜交瘤細胞株中成功篩選出2株配對良好,抗原位點高度保守的單克隆抗體雜交瘤細胞株。用其制備的FOB金標檢測試劑產品對四百多份大便隱血樣本進行性能評價,結果顯示自制Hb單抗具有較高的抗原位點保守性及較強的活性效價及親和力。

            • 稀釋線性

            用0.01 M pH7.4 PBS將血紅蛋白凍干粉稀釋成2500 μg/ml至24 ng/ml共15個濃度梯度,用自制的鼠源抗血紅蛋白單抗(2B8)進行膠體金標記,用自制的的另一株鼠源血紅蛋白單抗(4G7)包被硝酸纖維素膜,按“雙抗體夾心”金標免疫層析檢測試劑產品的制備工藝并進行陰陽符合率、穩定性及CV值檢測。結果顯示:最低檢測線24 ng/ml,靈敏度高,最大檢測上限2500 μg/ml,不會造成假陰性;在24 ng/ml---100 μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系(R2 = 0.9999),可定量檢測。

            • 臨床對比

            408份大便隱血便樣來自蘭州大學第二醫院臨床檢驗中心,對比試劑A(醫院檢測用試劑)和對比試劑B均為國內臨床檢驗中使用量較大的FOB金標檢測試劑產品。結果顯示:自制金標檢測試紙條的陽性率為61.3% 高于同類金標對比試劑A(44.4%)和金標對比試劑B(47.5%),結果見表1和圖2
            1:自制試劑及對比試劑對大便隱血樣本檢測結果

             

              自制試劑 對比試劑A 對比試劑B  1:自制試劑及對比試劑對大便隱血樣本檢測陽性率
            樣本數 408 408 408
            陽性 250 181 194
            陽性率 61.30% 44.40% 47.50%


             

            • 特異性

            自制試劑大便隱血(FOB)檢測試劑檢測人和不同動物血紅蛋白試驗,以膠體金定量儀器檢測的Dr值為參照進行比較。
            2 Hb單克隆抗體與其他動物來源Hb交叉反應結果

            Hb濃度
            (μg/ml)
            人Hb 牛Hb 豬Hb 羊Hb 雞Hb
            100 0.934 0.035 0.035 0.032 0.03
            50 0.825 0.033 0.033 0.031 0.032
            25 0.629 0.032 0.03 0.033 0.036
            12.5 0.425 0.034 0.032 0.033 0.03
            6.25 0.393 0.031 0.035 0.036 0.032
            3.125 0.332 0.036 0.036 0.034 0.031
            1.56 0.282 0.031 0.032 0.03 0.031
            0.78 0.236 0.032 0.03 0.03 0.035
            0.39 0.204 0.036 0.031 0.035 0.032
            0.195 0.169 0.034 0.034 0.031 0.031
            0.0975 0.146 0.031 0.031 0.035 0.032
            0.048 0.183 0.03 0.035 0.034 0.03
            0.024 0.106 0.03 0.032 0.03 0.03
            陰性對照 0.032 0.033 0.036 0.035 0.033
             

            以上實驗統計結果表明:
            (1)人Hb抗鼠單抗與其他實驗動物(牛、豬、羊、雞)Hb抗原沒有交叉反應;
            (2)用間接法和雙抗夾心法做的人和其它實驗動物血清蛋白交叉反應實驗結果,可以判定2B8和4G7特異性較強。

             
            參考文獻:
            [1] 糞便潛血檢測定量法在結直腸癌及其他下消化道出血性疾病中的應用分析

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